觀察的內(nèi)容包括細(xì)胞是否生長(zhǎng)良好,形態(tài)是否正常,有無(wú)污染,培養(yǎng)基的PH是否太酸或太堿(由酚紅指示劑指示),此外對(duì)培養(yǎng)溫度和CO2濃度也要定時(shí)檢查。一般原代培養(yǎng)進(jìn)入培養(yǎng)后有一段潛伏期(數(shù)小時(shí)到數(shù)十天不等),在潛伏期細(xì)胞一般不分裂,但可貼壁和游走。過(guò)了潛伏期后細(xì)胞進(jìn)入旺盛的分裂生長(zhǎng)期。細(xì)胞長(zhǎng)滿瓶底后要進(jìn)行傳代培養(yǎng),將一瓶中的細(xì)胞消化懸浮后分至兩到三瓶繼續(xù)培養(yǎng)。每傳代一次稱為“一代”。二倍體細(xì)胞一般只能傳幾十代,而轉(zhuǎn)化細(xì)胞系或細(xì)胞株則可無(wú)限地傳代下去。轉(zhuǎn)化細(xì)胞可能具有惡性性質(zhì),也可能不死性(Immortality)而無(wú)惡性。培養(yǎng)正在生長(zhǎng)中的細(xì)胞是進(jìn)行各種生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)的良好材料。四、凍存及復(fù)蘇為了保存細(xì)胞,特別是不易獲得的突變型細(xì)胞或細(xì)胞株,要將細(xì)胞凍存。凍存的溫度一般用液氮的溫度—-196℃,將細(xì)胞收集至凍存管中加入含保護(hù)劑(一般為二甲亞砜或甘油)的培養(yǎng)基,以一定的冷卻速度凍存,終保存于液氮中。在極低的溫度下,細(xì)胞保存的時(shí)間幾乎是無(wú)限的。復(fù)蘇一般采用快融方法,即從液氮中取出凍存管后,立即放入37℃水中,使之在一分鐘內(nèi)迅速融解。然后將細(xì)胞轉(zhuǎn)入培養(yǎng)器皿中進(jìn)行培養(yǎng)。心臟中,心肌成纖維細(xì)胞約占正常心肌組織細(xì)胞總數(shù)的60%-70%。云南小鼠原代細(xì)胞分離
在短時(shí)間內(nèi)即可大量擴(kuò)增,并產(chǎn)生殺死細(xì)胞。的種類繁多,肉眼可見(jiàn),漂浮于培養(yǎng)液面上,可呈絲狀、管狀或樹枝狀等。2.合適的溫度一般哺乳類與禽類細(xì)胞在體外培養(yǎng)的適宜溫度是37~38℃,不適宜的環(huán)境溫度會(huì)影響細(xì)胞的生長(zhǎng)。細(xì)胞對(duì)低溫的耐受能力要強(qiáng)于對(duì)高溫的耐受能力,在低溫下,細(xì)胞的代謝活力及核分裂能力降低。若溫度不低于0℃,雖然細(xì)胞代謝受到影響,但無(wú)損傷作用;25~35℃時(shí),細(xì)胞以緩慢的速度生長(zhǎng);但若被置于40℃數(shù)小時(shí),則不不利于細(xì)胞生存、生長(zhǎng),甚至可導(dǎo)致其死亡。3.適宜的滲透壓高滲溶液或低滲溶液會(huì)引起細(xì)胞發(fā)生褶皺、腫脹、破裂。因此,滲透壓是體外培養(yǎng)細(xì)胞的重要條件之一。多數(shù)體外培養(yǎng)的細(xì)胞對(duì)滲透壓都有一定的耐受能力,實(shí)際應(yīng)用中,260~320mmol/L的滲透壓可適用于大多數(shù)細(xì)胞。4.氣體環(huán)境與pH細(xì)胞的體外培養(yǎng)需要理想的氣體環(huán)境,氧氣、二氧化碳是細(xì)胞生存的必要條件。氧氣參與細(xì)胞的三羧酸循環(huán),為細(xì)胞生存、代謝與合成提供能量;二氧化碳既是細(xì)胞的代謝產(chǎn)物,是細(xì)胞生長(zhǎng)的必需成分,又與維持培養(yǎng)液的pH有關(guān)。大多數(shù)細(xì)胞適宜的pH范圍往往是~。在開放式培養(yǎng)中,以5%的二氧化碳?xì)怏w比例為宜。寧夏血液原代細(xì)胞購(gòu)買人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞分離自臍帶靜脈,一般用于生理學(xué)和藥理學(xué)研究。
下端伸入瓶身并與設(shè)于瓶身內(nèi)的纖維板固定連接,并且在活動(dòng)圓盤和纖維圓盤之間的連接桿上套裝有彈簧。進(jìn)一步的,所述活動(dòng)圓盤的四周設(shè)有密封圈。進(jìn)一步的,所述彈簧處于自然狀態(tài)或輕微壓縮狀態(tài)時(shí),活動(dòng)圓盤與阻隔環(huán)相接觸。進(jìn)一步的,所述纖維板采用具有阻隔和透氣特性的柔性網(wǎng)格纖維材料制作。進(jìn)一步的,所述外接圓柱的直徑為2cm,所述正壓口的直徑為5mm,并可采用肝素帽封閉。進(jìn)一步的,所述活動(dòng)圓盤和纖維圓盤的直徑為。進(jìn)一步的,所述加樣口為直徑,該開口可通過(guò)螺紋連接透氣瓶蓋。進(jìn)一步的,所述瓶身底部的四個(gè)角設(shè)置有8個(gè)直角三角支架。本發(fā)明的有益效果如下:本發(fā)明可以根據(jù)所要爬片的組織塊大小和數(shù)量提供25cm2和75cm2兩種不同規(guī)格長(zhǎng)方體瓶身供爬片,能提高爬片的效率。本發(fā)明采用一體式設(shè)計(jì),減少了原代細(xì)胞提取過(guò)程中易發(fā)生的污染的可能性,另外一體式設(shè)計(jì)也減少了新手或不熟練操作流程實(shí)驗(yàn)員的時(shí)間成本和器材消耗。本發(fā)明巧妙的利用纖維網(wǎng)格板,一方面網(wǎng)格板的材質(zhì)是柔性的,不易因形變而碎裂,另一方面不僅可以固定組織塊,網(wǎng)格設(shè)計(jì)還可以讓培養(yǎng)基滲入,可謂一舉兩得,且網(wǎng)格板孔徑大小可以定制,滿足不同受眾的要求。
每15min搖晃一次,消化時(shí)間根據(jù)組織來(lái)定,約1-2h;5.待大部分組織塊消化成透明狀時(shí),用40μm的細(xì)胞濾網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞,收集;6.用培養(yǎng)基重懸,置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)。常見(jiàn)問(wèn)題解答:Q:為什么我取得原代織,分離的卻不是細(xì)胞?A:取材時(shí),我們要熟悉所需組織的類型和部位特征,選擇細(xì)胞集中、活力較好的部分。避免結(jié)締等正常組織。Q:若是細(xì)胞中混成纖維細(xì)胞,如何去除?A:成纖維細(xì)胞的去除對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)十分重要。由于成纖維細(xì)胞貼壁速度細(xì)胞快,可利用反復(fù)貼壁法使二者分離,進(jìn)而達(dá)到成纖維細(xì)胞的目的。Q:為什么離心后,沒(méi)有細(xì)胞分離出來(lái)?A:需要考慮消化酶的因素,由于組織較致密,胰酶無(wú)法消化,一般選用膠原酶,如膠原酶Ⅳ。若是組織十分致密可以再結(jié)合機(jī)械法,如研磨或者攪拌加速細(xì)胞分散。如下表為二者的區(qū)別:膠原酶胰酶來(lái)源細(xì)菌胰臟消化組織纖維多的硬組織軟組織對(duì)細(xì)胞影響傷害小長(zhǎng)時(shí)間有損傷作用力度緩和強(qiáng)注:膠原酶分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型以及肝細(xì)胞膠原酶,根據(jù)分離的組織類型需選擇合適的膠原酶類型。Q:消化時(shí)間如何確定?A:具體的消化酶的量和消化時(shí)間可根據(jù)組織類型和多少進(jìn)行調(diào)整。Q:消化之前為什么用EDTA?A:EDTA是一種非酶消化物,又稱螯合劑,對(duì)一些組織。轉(zhuǎn)染的目的是產(chǎn)生重組蛋白,或特異性增強(qiáng)或控制轉(zhuǎn)染細(xì)胞中的基因表達(dá)。
展開全部原代2113細(xì)胞和傳代細(xì)胞培養(yǎng)有含義5261、培養(yǎng)過(guò)程、培養(yǎng)結(jié)果和應(yīng)用四個(gè)方面4102區(qū)別:16531、含義不同原代培養(yǎng)是直接從生物體獲取組織或的一部分進(jìn)行培養(yǎng),也稱初代培養(yǎng)。原代培養(yǎng)是將培養(yǎng)物放置在體外生長(zhǎng)環(huán)境中持續(xù)培養(yǎng),中途不分割培養(yǎng)物的培養(yǎng)過(guò)程。有幾方面含義:原代培養(yǎng)中的代并非細(xì)胞的代數(shù),因?yàn)榕囵B(yǎng)過(guò)程中細(xì)胞經(jīng)多次分裂已經(jīng)產(chǎn)生多代子細(xì)胞。傳代培養(yǎng)是指需要將培養(yǎng)物分割成小的部分,重新接種到另外的培養(yǎng)器皿(瓶)內(nèi),再進(jìn)行培養(yǎng)的過(guò)程。2、培養(yǎng)過(guò)程不同原代培養(yǎng)的基本過(guò)程包括取材、培養(yǎng)材料的制備、接種、加培養(yǎng)液、置培養(yǎng)條件下培養(yǎng)等步驟,在所有的操作過(guò)程中,都必須保持培養(yǎng)物及生長(zhǎng)環(huán)境的無(wú)菌。傳代培養(yǎng)時(shí)要注意無(wú)菌操作并防止細(xì)胞之間的交叉污染。所有操作要盡量靠近酒精燈火焰。每次只進(jìn)行一種細(xì)胞的操作。取出長(zhǎng)成單層的原代培養(yǎng)細(xì)胞,倒掉瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)液,加入消化液。細(xì)胞變圓,相互之間不再連片時(shí)將消化液倒掉,加入新鮮培養(yǎng)液,吹打,制成細(xì)胞懸液。3、培養(yǎng)結(jié)果不同原代培養(yǎng)細(xì)胞會(huì)分裂。原代培養(yǎng)的細(xì)胞一般傳至10代左右就不容易傳下去了,細(xì)胞的生長(zhǎng)就會(huì)出現(xiàn)停滯,大部分細(xì)胞衰老死亡。細(xì)胞接種后一般幾小時(shí)內(nèi)就能貼壁,并開始生長(zhǎng)。本公司生產(chǎn)的SD大鼠心肌成纖維細(xì)胞采用混合酶消化、密度梯度離心制備而來(lái)。內(nèi)蒙古大鼠原代細(xì)胞購(gòu)買
細(xì)胞操作都需嚴(yán)格按照無(wú)菌操作進(jìn)行。云南小鼠原代細(xì)胞分離
本實(shí)用新型涉及細(xì)胞培養(yǎng)箱領(lǐng)域,尤其涉及的是一種新型原代細(xì)胞培養(yǎng)箱。背景技術(shù):現(xiàn)有技術(shù)中,原代培養(yǎng),是指由體內(nèi)取出組織或細(xì)胞進(jìn)行的培養(yǎng),也叫初代培養(yǎng)。原代培養(yǎng)離體時(shí)間短,遺傳性狀和體內(nèi)細(xì)胞相似,適于做細(xì)胞形態(tài)、功能和分化等研究。較為嚴(yán)格地說(shuō)是指成功傳代之前的培養(yǎng),此時(shí)的細(xì)胞保持原有細(xì)胞的基本性質(zhì),如果是正常細(xì)胞,仍然保留二倍體數(shù)。但實(shí)際上,通常把代至第十代以內(nèi)的培養(yǎng)細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。利用原代培養(yǎng),可對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)進(jìn)行藥物的篩選,根據(jù)細(xì)胞對(duì)加入的化療藥物的敏感性來(lái)幫助選擇的化療方案,有可能起到增強(qiáng)療效、降低副作用的作用。而實(shí)驗(yàn)室在進(jìn)行原代細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,為得到更多的細(xì)胞進(jìn)行篩查,往往需要同時(shí)對(duì)大量的細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),而市面上單層或雙層設(shè)計(jì)的細(xì)胞培養(yǎng)箱已難以滿足實(shí)驗(yàn)者的需求,另外市面上也有一些原代細(xì)胞培養(yǎng)箱,但其儲(chǔ)藏空間設(shè)計(jì)不合理,空間利用率低,在存放大量的細(xì)胞培養(yǎng)皿時(shí),其占地面積也大,不方便實(shí)驗(yàn)者存放。同時(shí),無(wú)毒和無(wú)菌是體外培養(yǎng)細(xì)胞的首要條件,培養(yǎng)皿作為用于細(xì)胞培養(yǎng)的主要實(shí)驗(yàn)室器皿,常存儲(chǔ)于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行貯藏培養(yǎng),市場(chǎng)上的大型原代細(xì)胞培養(yǎng)箱由于空間設(shè)計(jì)過(guò)大。云南小鼠原代細(xì)胞分離