免疫動(dòng)物是用目的抗原免疫小鼠,使小鼠產(chǎn)生致敏B淋巴細(xì)胞的 過(guò)程。 一般選用6-8周齡雌性BALB/c小鼠,按照預(yù)先制定的免疫方案進(jìn)行免疫注射。 抗原通過(guò)血液循環(huán)或淋巴循環(huán)進(jìn)入外周免疫部位,刺激相應(yīng)B淋巴細(xì)胞克隆,使其活化、增殖,并分化成為致敏B淋巴細(xì)胞。細(xì)胞融合采用二氧化碳?xì)怏w處死小鼠,無(wú)菌操作取出脾臟,在平皿內(nèi)擠壓研磨,制備脾細(xì)胞懸液。 將準(zhǔn)備好的同系骨髓瘤細(xì)胞與小鼠脾細(xì)胞按一定比例混合,并加入促融合劑聚乙二醇。在聚乙二醇作用下,各種淋巴細(xì)胞可與骨髓瘤細(xì)胞發(fā)生融合,形成雜交瘤細(xì)胞。抗體通過(guò)與細(xì)菌或病毒表面的抗原結(jié)合來(lái)阻止它們進(jìn)一步侵襲機(jī)體。安徽專業(yè)抗體補(bǔ)給公司
抗體結(jié)構(gòu)域:輕鏈有VL和CL兩個(gè)結(jié)構(gòu)域;IgG、IgA和IgD的重鏈有VH、CH1、CH2和CH3四個(gè)結(jié)構(gòu)域;IgM和IgE的重鏈有五個(gè)結(jié)構(gòu)域,即多一個(gè)CH4結(jié)構(gòu)域。每個(gè)結(jié)構(gòu)域由約110個(gè)氨基酸組成,氨基酸序列具有相似性,其二級(jí)結(jié)構(gòu)是由幾條多肽鏈折疊形成的兩個(gè)反向平行的β片層(anti-parallel β sheet)構(gòu)成的,兩個(gè)β片層中心的兩個(gè)半胱氨酸殘基由一個(gè)鏈內(nèi)二硫鍵垂直連接,形成一個(gè)“β桶狀(βbarrel)”或“β-三明治 (β sandwich)”結(jié)構(gòu),這種折式稱為免疫球蛋白折疊(immunoglobulin folding)。許多膜型和分泌型的蛋白質(zhì)分子也含有這類獨(dú)特折疊的二級(jí)結(jié)構(gòu),因此,這類分子被統(tǒng)稱為免疫球蛋白超家族(immunoglobulinsuperfamily,IgSF)。山東IgG抗體補(bǔ)給公司重組抗體技術(shù)使得科學(xué)家能夠定制和改良抗體,以應(yīng)對(duì)不同的疾病挑戰(zhàn)。
抗體IgG可通過(guò)其Fc段與表面具有相應(yīng)受體的細(xì)胞結(jié)合,產(chǎn)生不同的生物學(xué)作用。調(diào)理作用(opsonization)指IgG抗體(特別是IgG1和IgG3)的Fc段與中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞表面相應(yīng)的Fc受體結(jié)合,從而增強(qiáng)吞噬細(xì)胞的吞噬作用。例如,細(xì)菌特異性的IgG抗體可通過(guò)其Fab段與相應(yīng)的細(xì)菌抗原結(jié)合后,以其Fc段與巨噬細(xì)胞或中性粒細(xì)胞表面相應(yīng)的Fc受體結(jié)合,通過(guò)IgG的Fab段和Fc段的“橋聯(lián)”作用,促進(jìn)吞噬細(xì)胞對(duì)細(xì)菌的吞噬??贵w依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC)指具E有殺傷活性的細(xì)胞(如NK細(xì)胞)通過(guò)其表面的Fc受體識(shí)別包被于靶細(xì)胞表面抗原(如病毒感染細(xì)胞或腫瘤細(xì)胞)上的抗體的Fc段,直接殺傷靶細(xì)胞。NK細(xì)胞是介導(dǎo)ADCC的主要細(xì)胞??贵w與靶細(xì)胞上的抗原結(jié)合是特異性的,而表達(dá)Fc受體細(xì)胞的殺傷作用是非特異性的 。
抗體水解片段:在一定條件下,Ig分子肽鏈的某些部分易被蛋白酶水解為不同片段。木瓜蛋白酶(papain)和胃蛋白酶(pepsin)是很常用的兩種Ig蛋白水解酶,并可籍此研究Ig的結(jié)構(gòu)和功能,分離和純化特定的12多肽片段。木瓜蛋白酶水解Ig的部位是在鉸鏈區(qū)二硫鍵連接的兩條重鏈的近N端,可將Ig裂解為兩個(gè)完全相同的Fab段和一個(gè)Fc段。Fab段即抗原結(jié)合片段(fragment antigenbinding,F(xiàn)ab),由一條完整的輕鏈與重鏈的VH和CHl結(jié)構(gòu)域組成。一個(gè)Fab片段為單價(jià),可與抗原結(jié)合但不產(chǎn)生凝集反應(yīng)或沉淀反應(yīng);Fc段即可結(jié)晶片段(fragment crystallizable,F(xiàn)c),由Ig的CH2和CH3結(jié)構(gòu)域組成。Fc段無(wú)抗原結(jié)合活性,是Ig與效應(yīng)分子或細(xì)胞相互作用的部位??贵w按其反應(yīng)形式分為凝集素、沉降素、抗毒、溶解素、調(diào)理素、中和抗體、補(bǔ)體結(jié)合抗體等。
IgE是什么?與過(guò)敏有什么關(guān)系?IgE是如何參與過(guò)敏反應(yīng):IgE的尾巴則和效應(yīng)細(xì)胞(肥大細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞)粘住。上述過(guò)程稱為“致敏”。游離狀態(tài)的IgE抗體半衰期是2-3天,如果長(zhǎng)期不接觸變應(yīng)原,致敏狀態(tài)可逐漸消失。但是,當(dāng)此過(guò)敏原再次進(jìn)入機(jī)體后,人體免疫系統(tǒng)就立即被認(rèn)識(shí)它的IgE抓住,IgE的尾巴給肥大細(xì)胞報(bào)信,細(xì)胞釋放組胺等炎性介質(zhì),使血管擴(kuò)張,腺體分泌增加等,作用于組織部位,從而引發(fā)各種過(guò)敏癥狀。在各類過(guò)敏性疾病中,IgE與肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞表面的特異性受體結(jié)合,導(dǎo)致細(xì)胞信號(hào)啟動(dòng),因此在過(guò)敏體質(zhì)或超敏患者中,血清中總IgE水平明顯高于健康人群??贵w的產(chǎn)生主要由B細(xì)胞負(fù)責(zé),它們可以識(shí)別并生成特異性的抗體以應(yīng)對(duì)傳染。山東IgG抗體補(bǔ)給公司
特定的抗體可以用于制備特異性的試劑盒,用于檢測(cè)特定病原體或標(biāo)志物。安徽專業(yè)抗體補(bǔ)給公司
抗體主要功能:?jiǎn)?dòng)補(bǔ)體產(chǎn)生攻膜復(fù)合物使細(xì)胞溶解破壞。人IgG1~3和IgM與相應(yīng)抗原結(jié)合后,可因構(gòu)象改變而使其CH2和CH3結(jié)構(gòu)域內(nèi)的補(bǔ)體結(jié)合點(diǎn)暴露,從而通過(guò)經(jīng)典途徑啟動(dòng)補(bǔ)體系統(tǒng),產(chǎn)生多種效應(yīng)功能,其中IgM、IgG1和IgG3啟動(dòng)補(bǔ)體系統(tǒng)的能力較強(qiáng),IgG2較弱。IgA、IgE和IgG4本身難以啟動(dòng)補(bǔ)體,但在形成聚合物后可通過(guò)旁路途徑啟動(dòng)補(bǔ)體系統(tǒng)。通常情況下,lgD不能啟動(dòng)補(bǔ)體。調(diào)理吞噬和ADCC:IgG可通過(guò)其Fc段與表面具有相應(yīng)受體的細(xì)胞結(jié)合,產(chǎn)生不同的生物學(xué)作用。安徽專業(yè)抗體補(bǔ)給公司